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無菌操作的技術和注意事項
  • 發布日期:2020-05-15      瀏覽次數:1406
    • 1、玻璃器皿的消毒和清潔

      ⑴新購玻璃器皿的處理新購玻璃器皿應用熱肥皂水洗刷,流水沖洗,再用1%~2%鹽酸溶液浸泡,以除去游離堿,再用水沖洗。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等,經清水洗凈后應注入濃鹽酸少許,慢慢轉動,使鹽酸布滿容器內壁數分鐘后傾出鹽酸,再用水沖洗。

       

      ⑵污染玻璃器皿的處理

      ①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%shi炭酸浸泡,再煮沸30分鐘,亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產生泡沫,然后用清水沖洗至無肥皂為止。然后用少量蒸餾水沖洗。

      ②細菌培養用的試管和培養皿可先行集中,用1kg/cm2高壓滅菌15~30分鐘,再用熱水洗滌后,用肥皂洗刷,流水沖洗。

      ③吸管使用后應集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時,逐支用流水反復沖洗,再用蒸餾水沖洗。

      ④油蠟沾污的器皿,應單獨滅菌洗滌,先將沾有油污的物質棄去,倒置于吸水紙上,100℃烘干半小時,再用堿水煮沸,肥皂洗滌,流水沖洗。必要時可用二jia苯祛污。

      ⑤染料沾污的器皿,可先用水沖洗,后用清潔或稀鹽酸洗脫染料,再用清水沖洗。一般染色劑呈堿性,所以不宜用肥皂的堿水洗滌。

      ⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水沖洗,再用肥皂或弱堿性煮沸,自然冷卻后,流水沖洗。被結核桿菌污染或不易洗凈的玻片,可置于清潔液內浸泡后再沖洗。

       

      2、無菌器材和液體的準備將玻璃器具中的培養皿、培養瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后,用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花,裝入干凈的鋁盒或鐵盒中,于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時,取出備用。對于手術器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液,則采用高壓蒸氣滅菌法,即在15磅的條件下,加熱20分鐘。而對于MEM培養液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后使用。

       

      3、在無菌操作過程中,重要的是要保持工作區的無菌、清潔。因此,在操作前20~30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈,并認真洗手和消毒。在操作時,嚴禁喧嘩,嚴禁用手直接拿無菌物品,如瓶塞等,而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培養瓶應在超凈臺內操作,并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。對于吸管應先用手拿后1/3處,戴上膠皮乳頭,并用酒精燈燒烤之后再吸液體。

       

      4、常用清潔液的配制法

      ⑴重鉻suan鉀清潔液:可根據不同需要,選用下列的任何一種濃度。先將重鉻suan鉀溶于水中,再慢慢加入濃硫酸。注意,此時可產生高熱,應防止容器破裂。重鉻suan鉀清潔液除污力強,腐蝕性大,應避免接觸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質,此液應貯存于帶蓋的容器中。如清潔效力較差,可再加入少量重鉻suan鉀及濃硫酸,還可繼續使用。直到液體變藍綠色,即不能再用。配制重鉻suan鉀清潔液時,宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用

      玻璃器皿時,應特別注意防止產生高熱而破裂,切忌用量筒來配制。

       

      ⑵磷酸三鈉將其配成5%~10%水溶液,可用于洗滌玻璃器皿上的油污,但經常使用腐蝕玻璃,使器皿表面模糊、毛糙。

       

       

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