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      這大點關于ELISA試劑盒的關鍵之處,你都知道嗎?
    2. 發布日期:2020-12-18      瀏覽次數:1130
      •   ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。該產品適用于人、大小鼠等抗體ELISA檢測。
         
          標本的采集及保存:
          1、血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
          2、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
          3、細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
         
          ELISA試劑盒的關鍵之處:
          1、實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。
          2、在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。
          3、洗滌很重要:洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。
          4、如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
          5、ELISA試劑盒封閉更關鍵:封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。
          6、您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
          7、如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。
          8、好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
          9、蛋白封閉液則有所不同,是的。它們與開放位點結合并封閉,同時穩定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。
          10、血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。
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