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蛋白酶k在DNA提取中的作用
  • 發布日期:2022-11-15      瀏覽次數:1690
    • 蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中純化得到。蛋白酶k,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質印跡以及去除DNARNA制備中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。值得注意的是,蛋白酶k在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶k的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶k的作用,解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果

       

      在生物相關的領域當中,經常需要對DNA進行提取分析,這樣就可以快速有效地判斷生物種類,還可以更深入地對基因組成進行研究,而這類研究當中非常關鍵的一步就是從細胞當中提取出DNA。要知道DNA處在細胞核當中,如果采取簡單粗暴的手段來破壞細胞結構,也會同時破壞了更加脆弱的DNA結構,導致研究無法繼續進行下去。而有了蛋白酶k的幫助,就能有效分解細胞當中的所有蛋白質,從而把細胞核里面的DNA釋放出來,而且結構不會受影響。提取出來的DNA不但能夠保持完整性,而且還保持了生命的活性,能夠通過簡單的方式進行增殖。

       

      那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢?

      只要將蛋白酶k保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,就能有效保證12月。而使用時也要注意,孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

       

      以上為大家介紹的就是蛋白酶kDNA提取中的作用,有了這種技術,也就可以更方便更準確地進行生物基因領域的研究。目前這種技術也進入到了實際的生產當中,在遺傳育種以及疾病治療當中都發揮了重要的用途。

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