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DMEM(低糖)的注意事項和使用步驟
  • 發布日期:2023-03-06      瀏覽次數:1385
    • DMEM培養基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基,是在MEM培養基的基礎上研制的。
      與MEM比較增加了各種成分的用量,同時又分為高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。
      DMEM低糖培養基用于養干細胞可防分化,DMEM高糖可養大多數哺乳動物的細胞。

      注意事項:
      1、培養及長期放置,需要2-8℃避光保存,請勿低溫凍存。
      2、培養基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不穩定、易分解,長期放置后使用若發現細胞生長變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨酰胺,來維持細胞正常代謝。
      3、含有NaHCO3的培養基開瓶次數較多后培養基內的CO2會逐漸溢出,PH值上升,培養基的顏色會偏紫色。
      培養基偏堿性會造成細胞生長停滯或死亡,建議分裝成小瓶使用或用HEPES調整至正常PH范圍。

      使用步驟:
      1、準確稱量試劑:根據不同菌類的用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
      2、校正PH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線、加熱溶解、補充水分、測定酸堿度,常用PH6.8-8.0的精密試紙或酸度計測定。
      用1NNaOH和1NHCI調節PH值到適宜范圍內。
      3、過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用DMEM低糖紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
      4、分裝:將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內,塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
      5、滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。
      一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽孢有較強的抗熱性,需經高壓蒸氣滅菌才能達到滅菌的目的。
      根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。
      因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。
      而在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。

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