在ELISA試劑盒中，進行各項試驗條件的挑選是很重要的，其間包括:
（1） 固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，調查其顯色反響是否均一性，據此判明其吸附功能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，調查陽性標本的OD值。挑選OD值大而蛋白量較少的濃度。關于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。
（3） 酶符號抗體作業濃度的挑選：首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定（見酶符號抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度）在正式試驗系統里精確地滴定其作業濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應留意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現在較為滿意的供氫體。底物作用一段時刻后，應參加強酸或強堿以終止反響。通常底物作用時刻，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參加。
