1. 產品分類
      您現在的位置:首頁 > 技術文章 > ELISA中必要的三個試劑
      ELISA中必要的三個試劑
    2. 發布日期:2024-06-18      瀏覽次數:439
      • 完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
        (1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
        (2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
        (3)酶的底物;
        (4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
        (5)酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;
        (6)洗滌液;
        (7)酶反應終止液。

        免疫吸附劑
        已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。

        固相載體
        固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學反應聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或蛋白質抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。

        ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用,專用于EILSA的產品稱為ELISA板,國際上標準的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測,有制成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架后,大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測,并可在特制的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經射線照射后,其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時空白值較大。

        良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產品的質量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后,分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件,使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個讀數與全部讀數的均數之差,應小于10%。

        與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特點為質軟板薄,可剪割,價廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

        為比較不同固相在某一ELISA測定中的優劣,可應用如下的試驗:用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,將它們進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預定的ELISA操作步驟進行測定,然后比較結果。在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別最大,這種載體就是這一ELISA測定項目的最合適的固相載體。

        在ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結合位點的暴露面處于最佳反應狀態,因此珠式ELISA的反應往往更為靈敏。小珠的另一特點是更易于使洗滌,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。


      主站蜘蛛池模板: 无码日韩人妻AV一区免费l| 亚洲AV综合永久无码精品天堂| 一级中文字幕乱码免费| 国产成人精品免费直播| 国产精品亚洲一区二区三区久久| 好男人视频在线观看免费看片| 亚洲精品无码aⅴ中文字幕蜜桃| 成人片黄网站色大片免费| 亚洲a∨无码精品色午夜| 女性无套免费网站在线看| 色综合久久精品亚洲国产| 免费观看亚洲人成网站| 一级毛片免费播放视频| 国产亚洲免费的视频看| 免费一级不卡毛片| 亚洲国产精品成人综合久久久 | 亚洲色成人网站WWW永久| 免费无码一区二区三区蜜桃| 久久亚洲国产成人亚| 国产成人免费午夜在线观看| 亚洲性无码AV中文字幕| 亚洲精品高清一二区久久| a级片免费在线播放| 亚洲第一成年人网站| 国产精品免费看香蕉| 久久久WWW成人免费精品| 亚洲色偷偷偷网站色偷一区| 国产成人免费网站| eeuss在线兵区免费观看| 久久精品国产亚洲AV网站| 国产va精品免费观看| 黄色毛片免费在线观看| 亚洲AV无码一区二区二三区入口 | 亚洲AV电影院在线观看| 国产精彩免费视频| 四虎一区二区成人免费影院网址 | 国产精品视频免费一区二区三区| 亚洲国产免费综合| 亚洲av极品无码专区在线观看 | 亚洲日韩小电影在线观看| 性一交一乱一视频免费看|