1. 產品分類
      您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 固體樣本處理方法
      固體樣本處理方法
    2. 發布日期:2024-07-04      瀏覽次數:509
      • 固體樣本處理方法:
                固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先收集細胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。


        1、組織標本:切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就用液氮研磨,將植物組織放在研缽中,加入適量液氮,充分研磨。

        2、細胞內蛋白樣本:
        許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
        (1)培養的細胞
        A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
        B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
        (2)組織的細胞
        切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

        3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。

        4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。

        5. 植物標本的采集及保存
        1、 稱取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
        2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
        3、 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
        4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙m(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存備用;
        5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。


        樣本收集注意事項
        1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
        3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。


      主站蜘蛛池模板: 国产小视频免费观看| av大片在线无码免费| 四虎影库久免费视频| 亚洲an日韩专区在线| 性做久久久久久免费观看| 亚洲图片校园春色| 久草视频在线免费| 7777久久亚洲中文字幕| 欧洲黑大粗无码免费| 亚洲国产成人精品无码区二本 | 国产亚洲精品影视在线| 免费亚洲视频在线观看| 亚洲av日韩av不卡在线观看| 国产精品免费一区二区三区| 亚洲午夜久久久久久久久久| 野花香高清在线观看视频播放免费| 国产亚洲精品美女久久久| 四虎国产精品免费永久在线| 久久久综合亚洲色一区二区三区| 美丽的姑娘免费观看在线播放| 亚洲国产精品网站久久| 午夜免费不卡毛片完整版| 羞羞的视频在线免费观看| 久久影视国产亚洲| 亚洲免费视频在线观看| 国产美女无遮挡免费视频网站 | 日本黄色免费观看| 国产人成网在线播放VA免费| 亚洲AV第一页国产精品| 日本精品人妻无码免费大全| 免费手机在线看片| 亚洲视频在线视频| 妞干网免费视频在线观看| 一区二区在线视频免费观看| 亚洲精品线在线观看| 日韩精品视频免费网址| 一个人看的www免费视频在线观看 一个人免费视频观看在线www | 亚洲成人网在线观看| 亚洲AⅤ无码一区二区三区在线| 在线看片免费人成视频播| 亚洲人成网男女大片在线播放|