YO-PRO-1/PI細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

YO-PRO-1/PI細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis Detection Kit with YO-PRO-1and PI)，簡稱YP1/PI細胞凋亡與壞死檢測試劑盒，是一種基于DNA綠色熒光染料YO-PRO-1 (YP1)和紅色熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)的雙熒光法檢測細胞凋亡和壞死的試劑盒。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀及其它熒光檢測系統。

YO-PRO-1，又名惡唑黃(Oxazole yellow)，簡稱YP1，是一種對正常動物細胞膜沒有通透性而對于凋亡細胞的細胞膜有通透性的DNA綠色熒光染料，常用于細胞凋亡的檢測。YO-PRO-1是一種非細胞膜穿透性的并對DNA具有高親和力的羰花青單體綠色熒光染料，在沒有與DNA結合的時候基本上沒有熒光，而與DNA結合后可以發出明亮的綠色熒光。在細胞凋亡發生時，細胞膜通透性發生改變，此時YO-PRO-1可以進入細胞內與DNA結合，發出明亮的綠色熒光，因此常使用本熒光染料用于分析和鑒定凋亡細胞。需要注意的是YO-PRO-1也能染色壞死細胞，因此需要和對壞死細胞特異性熒光染色的PI進行雙染才能有效判定細胞凋亡。

PI，即碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸紅色熒光染料，只能染色細胞膜完整性喪失的壞死細胞，并與核酸結合發出明亮的紅色熒光。因此， YO-PRO-1與碘化丙啶(PI)聯合使用，可以同時進行凋亡細胞和壞死細胞的檢測，凋亡細胞呈現綠色熒光，壞死細胞同時呈現紅色和綠色熒光陽性，活細胞很少或幾乎沒有熒光。

細胞死亡包括凋亡(apoptosis)、壞死(necrosis)、焦亡(pyroptosis)等多種形式。其中受調控的細胞死亡被稱為程序性細胞死亡(programmed cell death, PCD)。程序性細胞死亡包括凋亡、細胞程序性壞死(programmed necrosis)或壞死性凋亡(necroptosis)和焦亡等。從細胞膜的完整性角度來看，凋亡的特征是細胞膜的完整性會保留，而壞死的特征是細胞膜的完整性會喪失。

細胞凋亡是生物體發育等生命過程中普遍存在的、由基因決定的細胞主動有序的死亡方式。當細胞遇到內、外環境因子刺激時，啟動基因調控的保護措施，去除體內非必需細胞或即將發生特化的細胞。在這一過程中，細胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體，并迅速被巨噬細胞或鄰近細胞清除，不會導致炎癥反應，這是一種由基因控制、高度有序的細胞自主死亡，包含一系列信號事件組成的通路。細胞凋亡的主要特征包括細胞膜保持完整、細胞膜磷脂酰絲氨/酸外翻(Annexin V染色陽性)、基因組DNA片段化(DNA fragmentation) (即產生DNA ladder并且TUNEL染色陽性)、電鏡或熒光染色時細胞核碎裂或致密濃染、Caspase 3等激活、線粒體膜電位下降從線粒體內釋放等。

壞死通常被認為是一種偶發性的并且是被動的細胞死亡，如物理性或化學性的損害因素及缺氧與營養不良等都可以導致細胞壞死。壞死細胞初期細胞膜通透性增高，致使細胞腫脹，細胞器變形或腫大，早期細胞核無明顯形態學變化，最后細胞破裂，細胞膜喪失完整性，釋放出細胞內容物，并常引起炎癥反應，但不會出現細胞凋亡或自噬標志物。通常，凋亡對生命體是有利的，而壞死很可能是有害甚至是致命的。凋亡的晚期也可以發生繼發性壞死(secondary necrosis)。受細胞程序性調控的壞死(programmed necrosis)被稱為necropotosis。

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